血清的存在會影響脂質體的形成,建議配制核酸轉染試劑復合物時采用無血清培養基(一般推薦MEM 培養基)。
轉染試劑能否凍存?
不能。本試劑一定要4 ℃保存,要注意避免反復多次長時間開蓋,長時間開蓋會導致脂質體氧化而影響轉染效率。
使用脂質體核酸轉染試劑需要注意什么?
1)細胞鋪板密度較高,以90%-95%為佳;
2)使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉染效率;
3)制備轉染復合物時要求用無血清培養基稀釋DNA和轉染試劑;
4)轉染的時候培養基中不能添加抗生素;
5)試劑應該在4度保存,要注意避免多次反復長時間開蓋;
6)初次使用應優化DNA濃度和陽離子脂質體試劑量以得到最大的轉染效率。DNA 和轉染試劑的比例,通常推薦是1:2-1:3。
不需要。脂質體復合物可以穩定存在6個小時。如果在進行轉染前沒有進行細胞換液,為了保證細胞正常生長所需的營養,需要在4~6小時后換用新的培養基。但如果轉染之前已進行過換液則在脂質體轉染后不需要進行再次換液。
若想提高轉染效率,應該注意什么?
1)轉染時細胞的密度,90%-95%。
2)轉染時,核酸和脂質體稀釋液要用MEM無血清培養基。
3)轉染后4-6h可選擇換液。
可否進行DNA和siRNA的共轉染?效果如何?
DNA和siRNA的共轉染時候,siRNA轉染效率差。
轉染試劑可否進行慢病毒包裝的轉染呢?
慢病毒包裝是可以的,但是在進行慢病毒包裝的效率不一定和轉染的效率有關,同時還跟包裝質粒的選擇和質粒間的比例有關系。
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